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甚么是卵白印迹法?

卵白印迹法是一种遍及的用于卵白检测和定量的手艺。它能够从庞杂的卵白夹杂物(比方细胞裂解物)平分手和检测某种特定的方针卵白。卵白印迹法可操纵于诊断、生物手艺、份子生物学、卵白质组学等,且在评价细胞中的卵白抒发程度和巨细和其余属性的变更时均普遍依靠于这类体例。

 

卵白印迹法

按照操纵的二抗,有几种卵白印迹法可供斟酌,靶卵白检测能够操纵比色法、化学发光法或荧光法。这些体例的描写以下,且须要差别的检测装备。比方,可操纵 X 射线胶片或数字成像装备检测化学发光,而荧光二抗则须要操纵荧光成像仪停止检测。每种体例都有各自的优错误谬误,须要在挑选体例时酌情斟酌。

咱们先容过的另外一种体例 ScanLater™ 卵白印迹检测体系初次在多功效微孔板读板机平台中完成卵白印迹检测。操纵这类无底物的检测,钻研职员可取得与传统化学发光检测相称的活络度,同时将卵白印迹、ELISA 和其余操纵连系在一台读板机上。咱们以下的精选操纵申明供给进一步的具体信息。

ScanLater Western Blot检测卡盒

ScanLater™ 卵白印迹检测体系能够在微孔板读板机上停止卵白印迹检测

 

卵白印迹检测任务流程

这是停止典范卵白印迹检测的步骤:

卵白印迹检测任务流程

 

1. 电泳 – 起首操纵凝胶电泳按巨细分手卵白。

2. 转移 – 卵白随后被转移至凡是由硝酸纤维素或 PVDF 制成的印迹膜上,而后操纵对方针卵白具备特同性的一抗停止探针检测。

3. 用封锁缓冲液封锁这可避免一抗(下一步)和膜自身连系。

4. 一抗孵育一抗与靶卵白连系。

5. 用洗濯缓冲液洗濯洗濯掉未连系的一抗。

6. 二抗孵育增加一种能辨认和连系一抗的二抗。这类二抗可偶联能检测方针卵白的酶或其余物资,方针卵白在印迹上以条带显现。

7. 用洗濯缓冲液洗濯 – 洗濯掉未连系的二抗。

8. 操纵挑选的体例/化学进程停止检测 – 按照操纵的二抗,可经由进程比色法、荧光法或发光法检测靶卵白。

 

 

  • 比色卵白印迹法

    比色卵白印迹法

    比色卵白印迹法操纵酶联二抗和一种显色底物停止检测。

    长处:

    • 无需特别装备

    错误谬误:

    • 活络度无限(pg 规模)
    • 印迹可剥离和从头停止探针检测,以钻研额定的靶标

    化学发光卵白印迹法

    化学发光卵白印迹法

    化学发光卵白印迹法操纵一种偶联酶的二抗和一种发光底物。操纵 X 射线胶片和暗室装备或一个数字成像体系来检测成果。

    长处:

    • 活络度(fg 程度)
    • 印迹可剥离和从头停止探针检测

    错误谬误:

    • 成果能够长短线性的
    • 旌旗灯号的寿命很短
    • 检测所需的装备能够很贵且占空间

  • 荧光卵白印迹法

    荧光卵白印迹法

    荧光卵白印迹法操纵一种偶联荧光团的二抗,是以无需底物。须要操纵荧光成像仪来检测成果。

    长处:

    • 与比色法或发光法比拟,静态规模更大、线性更佳
    • 可操纵差别的荧光团停止多路传输

    错误谬误:

    • 活络度比化学发光法低
    • 须要一个公用的荧光成像体系

    ScanLater 免疫印迹检测体系

    ScanLater 免疫印迹检测体系

    借助 ScanLater 卵白印迹检测体系,二抗偶联时候分辩荧光基团,连系荧光法和化学发光法的长处。

    • 检测无需底物
    • 旌旗灯号在数月或更长时候内坚持不变
    • 活络度坚持在ng以下的程度
    • 宽静态规模

    旁观视频  

     

  • 经由进程 ScanLater 免疫印迹检测体系检测和定量卵白质

    卵白检测 ScanLater 卵白印迹检测

    卵白质检测对现今的制药和临床钻研很是首要,而免疫印迹检测则是一种最罕见的卵白检测体例。可操纵多种手艺来检测免疫印迹膜上的卵白,如荧光和化学荧光。但每种手艺都有其规模性,并且一直须要进步定量的精确性和静态规模。

    该操纵申明显现,因为背景下降、检测随时候坚持不变和读数的数目,静态规模扩展。另外,Scanlater 卵白印迹体系和化学发光法的比拟标明,活络度加强。

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    操纵成像和卵白印迹检测来考证 CRISPR 编辑的细胞

    操纵成像和卵白印迹检测来考证 CRISPR 细胞

    基因编辑已被普遍用于钻研基因抒发和卵白功效,但此中很多体例还需大批劳力并且并不精确1。CRISPR(成簇的纪律距离的短回文反复序列 )/Cas9 体系因为其高精确性和易用性,已成为一种受接待的基因编辑东西2。

    咱们在此论证了 SpectraMax i3x 多功效微孔板读板机和 ScanLater 卵白印迹检测体系若何能用于考证 CRISPR/Cas9 基因组编辑。

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  • Western 法板孔阐发:细胞热休克反映钻研

    Western 法板孔阐发:细胞热休克反映

    钻研细胞反映时可接纳多种体例来搜集信息 — 成像、细胞活性和增殖检测、检查卵白抒发变更的卵白印迹法等。凡是须要操纵多个仪器平台来搜集须要成果,在这个进程中能够须要领会几个软件包。

    在该操纵申明中,咱们展现了若何操纵单一仪器 SpectraMax® i3 多功效检测平台来搜集多个相干细胞参数的数据。

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    经由进程 ScanLater 卵白质印迹卵白Ladder估量卵白份子量

    预算卵白份子量

    ScanLater™ 卵白印迹卵白Ladder是 ScanLater™ 卵白印迹检测体系的一个首要构成局部。此卵白Ladder的首要操纵包含预算卵白份子量、可视化凝胶电泳和评价从凝胶到印迹的转移进程。

    领会用户若何遵守已针对其操纵优化的电泳和印迹任务流程。

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  • 基于铕标记卵白的卵白检测

    铕标记卵白的卵白检测

    操纵酶标仪(读板机)停止基于铕元素标记的 Western Blot 卵白检测和定量

    这里咱们展现了 SpectraMax® 多功效微孔板读板机顶用于卵白印迹阐发的一种新型体系。操纵铕标记二抗或标记有方针卵白的链霉亲和素对膜停止探针检测。铕 (Eu) 的荧光寿命较长,约为 1 毫秒,操纵时候分辩荧光 (TRF) 检测形式停止检测可明显削减来自自觉荧光或其余短折命发射来历的背景。

卵白印迹法资本

视频和搜集钻研会

ScanLater Western Blot检测卡盒

ScanLater™ 卵白印迹检测体系能够在微孔板读板机上停止卵白印迹检测

卵白印迹法相干产物